Сбор микроводорослей в природе и получение альгологически чистых популяций

При подсчете числа клеток в камере найдено, что в объеме, соответствующем маленькому квадратику, находится в среднем n клеток. По пропорции

находим, какое количество клеток x содержится в 1 см³ суспензии

Таким образом, при просчете 25 квадратов достаточно общую сумму клеток m разделить на 100 и умножить на 10⁶, чтобы сразу иметь число клеток в 1 см³ суспензии.

Учет числа клеток нефелометрически. Для проведения подобных определений могут быть использованы различные оптические приборы, дающие возможность измерения оптической плотности или мутности среды (денситометры, визуальные и фотоэлектронефелометры, а также колориметры ). В частности, удобно проводить измерения плотности суспензий на широко распространенных в лабораториях фотоэлектроколориметрах ФЭК-М-1954.

Для этого суспензия водорослей заливается в соответствующую кювету, помещаемую вместо одной из кювет (правая кювета) с водой или средой, по которым предварительно устанавливалась нулевая точка прибора.

Все измерения проводят с зеленым фильтром (для зеленых водорослей). Отчет ведется по правому барабану по шкале оптической плотности (красные шифры).

Для получения более точных результатов следует избегать образования пузырьков воздуха на стенках кюветы и суспензии.

При массовой работе с большим числом видов водорослей для первых прикидочных анализов можно пользоваться сравнением величин оптической плотности культуры (при одинаковом разведении), имея в виду, что показания ФЭК при этом отражают в относительных единицах не столько количество клеток в той или иной культуре, сколько общую биомассу водорослей (это вытекает из самого принципа колориметрии и соответствует специально поведенным определениям).

Однако ошибка такого определения оказывается довольно значительно в большинстве случаев удобнее (особенно при длительной работе с несколькими, отобранными культурами) выражать измеряемую величину не в показаниях ФЭК, а в количестве клеток на 1 мм суспензии.

Для этого проводится калибровка ФЭК и составляются градировочные кривые для каждой культуры, в дальнейшем по этим кривым определяется число клеток.

Градировочная кривая составляется следующим образом.

1. 
   В стандартных условиях интенсивной культуры выращивают необходимые виды водорослей.
   
2. 
   Из суспензии водорослей делают ряд последовательных разведений, чтобы на одной кювете можно было провести измерение в четырех-пяти точках по всей клетке оптической плотности.
   
3. 
   Проводят измерение разведенной суспензии на ФЭК на определенной, выбранной для измерения кювете. Практически наиболее удобными в работе оказываются кюветы толщиной 10 мм. При работе с различными плотностями суспензии можно составить кривые для нескольких кювет.
   
4. 
   Параллельно с измерением на ФЭК подсчитывают измеряемые плотности под микроскопом в камере Горяева. Подсчет под микроскопом в этих случаях должен быть особенно тщательным и с многократными повторностями.
   
5. 
   На основание полученных данных составляется соответствующая кривая для каждой культуры. Пример построенной таким образом градуировочной кривой приведен на рис 19.
   
6. 
   Для каждого прибора строится свой градировочная кривая, которая периодически проверяется (при нормальной работе прибора можно такую проверку проводить один раз в год).