Жем шөп өндірісіндегі биотехнология Жемшөптік культуралардың клеткалық және ұлпалық биотехнологиясы
жүктеу/скачать 2,17 Mb.
|
лекция
123 Beisembek Orintay SIWT 5
- Бұл бет үшін навигация:
- Жасуша суспензиясының мәдениеті.
| Каллус тіндерінің мәдениеті
Шалғынды жоңышқа мен жоңышқа клеткаларын алу процесінде каллус дақылдарының морфогендік потенциалды жүзеге асыруына Жарық жағдайлары, шайқау және өсіру ұзақтығы әсер етеді. Эмбриоидтар мен эмбриогендік құрылымдар үздіксіз жарық болған кезде ғана қалыптасады. Регенерация қабілеті жоғары беде мен жоңышқаның жасушалық суспензиялары Гамборг В5 сұйық қоректік ортасында, үздіксіз жарықтандыру және шайқау жағдайында каллустарды өсіру арқылы алынады. Пролиферация қарқыны және кейінгі субкультураға жеткілікті оңтайлы тығыздықтағы бастапқы суспензиялық жасуша культурасын қалыптастыру үшін қажетті уақыт кезеңі жасуша сызығының шығу тегіне байланысты айтарлықтай өзгереді. Жасуша суспензиясының мәдениеті. Трансплантациялар арасындағы уақыт аралығы 500 мың жасуша/мл суспензияға дейін тығыздыққа жеткеннен кейін әрбір жасуша сызығы үшін жеке анықталады. Беде мен жоңышқа мәдениетіндегі жасушалардың бастапқы тығыздығы 100 мың жасуша/мл суспензиядан төмен болмауы керек. Әйтпесе, жаңадан трансплантацияланған мәдениетте жасушалардың көбею қарқыны 5-10 есе төмендейді және морфогендік құрылымдардың түзілуі бұзылады.Трансплантациясыз беде мен жоңышқа суспензиясындағы жасушалардың тығыздығының жоғарылауы (500 мыңнан астам жасуша/мл) олардың 2-3 күн ішінде өлуіне әкеледі. Гамборгтың В5 гормонсыз ортасында бірнеше рет субкультурадан кейін жасушалық суспензия дақылдары жаппай мөлшерде проэмбриоидтар мен эмбриоидтар түзеді (100 дана/мл суспензияға дейін). Гамборг В5 агаризацияланған ортасына гормонсыз және оған кіретін барлық компоненттердің екі есе азаюымен трансплантацияланғаннан кейін проэмбриоидтар өсіп, морфогендік каллус тінін құрайды, онда бүршіктер, көшеттер және регенерант өсімдіктер пайда болады. Эмбриоидтар котиледонды жапырақтары бар, біріншілік жалғыз, содан кейін үш жапырақты жапырақтары мен тамыры бар өскіндерге айналады. Морфогендік каллус тінінде пайда болған көшеттерде тек үш жапырақты парақшалар пайда болады.Регенеранттарды морфогенетикалық көрсеткіштері бойынша зерттеу үшін 2-3 нағыз үш жапырақты жапырақтардың болатында олар вегетациялық тамырларға отырғызылады, содан кейін селекциялық-жылыжай кешені жағдайында немесе тұқым піскенге дейін далада өсіріледі. Өздігінен үйлеспеушілік кедергісі шалғынды жоңышқа регенеранттарын бастапқы өсімдікпен немесе басқа жасуша сызығының регенеранттарымен, бірақ бірдей сорт үлгісімен тозаңдандыру арқылы жеңіледі. Жоңышқада тұқымдар регенеранттардың өздігінен тозаңдануынан алынады. Генетикалық трансформация кезінде өсімдіктерді қалпына келтірудің бірнеше жолы бар. Олардың көпшілігі дифференциалданбаған жасуша дақылдарының түзілуіне негізделген. Жапырақты дискілер мен бөлінген доминантты орталықтардың әдістерімен жемшөп өсімдіктерін трансформациялау кезінде өсімдіктердің регенерациясы мақсатты және маркер гендері бар агробактериялармен егілген эксплант кесінділерінің бетінде пайда болатын каллус тінінен жүзеге асырылады. Бір жасуша сызығының морфогендік дақылдарынан қалпына келтірілген трансформациялық өсімдіктер қалаусыз гетерогенділікпен сипатталады және бірқатар морфологиялық және физиологиялық-биохимиялық белгілері бойынша бастапқы генотиптен ерекшеленеді. Морфогендік дақылдар 5-8 пассажға қарай гормонсыз және әртүрлі концентрациядағы фито-гормондары бар ортада регенерация қабілетін толығымен жоғалтады. Шабындық жоңышқа формаларын генетикалық түрлендіру әдісімен белгілердің бірімен мақсатты түрде құру үшін құрамында канамицин бар қоректік ортада ұзақ өсіру кезінде жоғары морфогенетикалық потенциалды және бастапқы генотиптердің құнды селекциялық белгілерін сақтайтын өсімдіктерді тікелей қалпына келтіру әдісі жасалды. жүктеу/скачать 2,17 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|