Основные принципы систематики прокариот
Метод титрования бактериофага по Грациа (на плотной питательной среде)
жүктеу/скачать 457,65 Kb.
|
ответы к экзамену
- Бұл бет үшін навигация:
- Внехромосомные факторы наследственности.
- Плазмиды
- Интегрированные плазмиды
| Метод титрования бактериофага по Грациа (на плотной питательной среде)
позволяет определить количество частиц фага в титруемом материале. Чашки с 20-25 мл МПА покрывают стерильной фильтровальной бумагой и подсушивают в термостате или под бактерицидной лампой (расстояние от лампы не более 2 м). Титруемый фаг разводят от 10-1 до 10-10 (как в предыдущем опыте) и по 1 мл переносят в другие пронумерованные пробирки (соответственно из 1-й в 1-ю и так далее до 10-й), в которые заранее наливают по 2,5 мл 0,7% МПА, расплавленного и остуженного до 45° С. В каждую из этих пробирок добавляют по 0,1 мл тест-культуры. Содержимое пробирок быстро перемешивают (не дать застыть агару) и выливают на поверхность среды в чашки Петри с номерами, соответствующими номерам пробирок. Через 30 мин чашки ставят в термостат. Учет результатов проводят через 18-20 ч. При большой концентрации фага (в первых чашках) произойдет сплошной лизис культуры. В тех разведениях фага, в которых находилось небольшое количество частиц фага, появятся изолированные колонии, которые подсчитывают. Чтобы установить количество частиц фага в 1 мл фаголизата, пользуются формулой: n = y×x, где n - искомое число; y - количество выросших на чашке колоний фага; x - разведение фага в чашке, в которой подсчитаны колонии. Например, если в чашке с разведением фага 10-8 (1:108) выросло 25 колоний, то в 1 мл исходной жидкости содержится 25×108 или 2,5×109частиц фага. Внехромосомные факторы наследственности. Внехромосомные факторы наследственности бактерий представлены плазмидами, вставочными последовательностями (Is-последовательности) и транспозонами. Все они образованы молекулами ДНК. Плазмиды — фрагменты ДНК. Выделяют автономные (не связанные с хромосомой бактерии) и интегрированные (встроенные в хромосому) плазмиды. • Автономные плазмиды существуют в цитоплазме бактерий и способны самостоятельно репродуцироваться; в клетке может присутствовать несколько их копий. • Интегрированные плазмиды репродуцируются одновременно с бактериальной хромосомой. Интеграция плазмид происходит при наличии гомологичных последовательностей ДНК, при которых возможна рекомбинация хромосомной и плазмидной ДНК (что сближает их с профагами). жүктеу/скачать 457,65 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|