Перемешать, выдержать 10 минут при комнатной температуре. Центрифугировать 10 минут при 3000 об/мин. Отобрать центрифугат:
Центрифугат
2,0
2,0
Раствор карбоната натрия
1,0
1,0
Фосфорновольфрамовый реактив
0,6
0,6
Перемешать, выдержать 30 минут при комнатной температуре. При длине волны 650 (620-700 нм) в кюветах с толщиной слоя 10 мм измерить оптическую плотность исследуемой пробы (Еиссл.) против холостой пробы.
Расчет результатов проводится по формуле:
Е иссл.* 300 С = --------------------, где
Е ст * 1000 С - концентрация мочевой кислоты в сыворотке крови (ммоль/л);
Е иссл. - экстинкция опытной пробы против холостой;
Е ст. - экстинкция стандартной пробы против холостой;
300- концентрация мочевой кислоты в стандартном растворе (мкмоль/л).
1000 – коэффициент перерасчета в ммоль/л
Нормальное содержание мочевой кислоты в сыворотке крови: у мужчин - 0,18 - 0,54 ммоль/л.; у женщин - 0.15-0.45 ммоль/л.
Результаты: Выводы: 2. Количественное определение мочевой кислоты в моче. Ход работы:
Перед началом исследования мочу развести в десять раз (1мл мочи/9мл Н2О)
Отмерить в пробирку, мл
Опыт
Контроль
Дистиллированная вода
4
4.5
Разбавленная моча (1:9)
0.5
-
Кислота серная
0.25
0.25
Вольфрамат натрия
0.25
0.25
Перемешать, выдержать 10 минут при комнатной температуре, отфильтровать, отобрать необходимое количество фильтрата
Фильтрат
2
2
Карбонат натрия
1
1
Фосфорновольфрамовый реактив
0.6
0.6
Перемешать, выдержать 30 минут при комнатной температуре, измерить оптическую плотность опытной пробы (Еопыт) против контрольной при 650 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.
Расчет концентрации мочевой кислоты проводят по формуле:
Е оп.* 300*10*Х С = --------------------, где
Е ст * 1000 С – содержание мочевой кислоты в моче, ммоль/сут;
Еоп. – экстинкция опытной пробы;
Ест. – экстинкция стандартной пробы;
300- содержание мочевой кислоты в стандартном растворе, мкмоль/л;
1000 – коэффициент перерасчета в ммоль/л
10 – разведение мочи;
Х – суточный диурез :1,5 л - мужчины, 1,2 л – женщины.
Нормальное содержание мочевой кислоты в моче составляет: 1.48-4.43 ммоль/сут
У вегетарианцев этот показатель<2,48 ммоль/сут. При употреблении пищи, содержащей большое количество пуринов, концентрация мочевой кислоты может возрастать до 5,9 ммоль/сут.
Результаты: Выводы:
Клинико-диагностическое значение: Содержание мочевой кислоты в крови зависит от пола, количества пуринов в пище, а также от интенсивности обмена нуклеопротеинов в организме.
Увеличение концентрации мочевой кислоты в плазме крови выше 0,54 ммоль/л - гиперурикемия. Гиперурикемиюдиагностируют при подагре, которая сопровождается отложением солей мочевой кислоты (уратов натрия) в хрящах, слизистой сумке суставов. При этом содержание мочевой кислоты в крови может быть повышено, а с мочой выделяться ее меньше, чем в норме. Гиперурикемия наблюдается также у пациентов с нефритом, почечной недостаточностью и др.
Гиперурикемия и подагра развиваются у пациентов с генетическими нарушениями активности ферментов синтеза пуриновых нуклеотидов (фосфорибозилпирофосфат-амидотрансферазы, гипоксантингуанин-фосфорибозил-трансферазы), у больных с синдромом Леша-Нихана.
Гипоурикемия наблюдается при генетическом дефекте ксантиноксидазы, что сопровождается накоплением ксантинов в крови пациентов и выведением их в большой концентрации с мочой (ксантинурия).
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА НА ЗАНЯТИИ
(выполняется по индивидуальным задачам для каждого студента).
