2.Taq-полимераза
–
температураға төзімді фермент, негізінен
комплементарлы принципте 3` - соңына жабысады да, тізбекті құрастыруға
кіріседі.
3.Дизоксинуклеотидүшфосфаттар қосындысы
(
dNТP): dATP , dGNP,
dTTP, dCTP , болуы керек. ДНҚ молекуласының екінші комплементарлы тізбегін
Taq-полимераза ферменті арқылы синтездеуге қолданылатын «құрылыс
материалы».
.
ПТР-дың қасиеттері
Арнайылығы
Сенімділігі
Жүргізілуі
Сезімталдығы
ПТР сатылары
•
Денатурация - ДНҚ-ны қос талшықты формасынан
бірқалыпты нысанға
ауыстыру, егер жоғары температуралардың әсерінен
қосымша қосалқы
базалық жұптар арасындағы сутегі байланыстары
•
Күйіп кету - праймерлерді бір жақты ДНҚ мақсатына қосу.
Примерлар
таңдалған фрагментті шектеп, ДНҚ-ның қарама-
қарсылығынтолықтыратын етіп таңдалады. Күйіп кету
Chargaff's complementarity
ережесіне сәйкес жүзеге асырылады.
•
Ұзарту (синтез) - пракер синтезінен кейін Так полимеразы
ДНҚ-ның
екінші шоғырлануын примердің 3 'аяғынан аяқтайды
Классикалық ПТР
Классикалық форматтағы полимеразды тізбекті реакция. ДНҚ және
ДНҚ құрамды микроорганизмдердің күдікті мутацияларын анықтауға
қолданылған. Ол оның бастапқы фрагменті ген-спецификалық
праймерлердің көмегімен амплифицирленеді. Реакцияның соңғы
нәтижесі зерттелетін материалдағы ДНҚ нысанасының бар екендігін
көрсетеді.
Кері транскрипциясы бар полимеразды тізбекті реакция. РНҚ құрамды
вирустардың геномының арнайы учаскелерін анықтау немесе нысана-
геннің транскрипциясын зерттеу үшін, алдымен ревертаза
ферментіменкатализдейтін қайтымды транскрипция реакциясын
пайдаланып, РНҚматрицадан ДНҚ-көшірмесін алады. Осылайша
синтезделген қосымша ДНҚлар ПТР-де ген-спецификалық праймерлер
үшін матрицалар болып табылады.
|