4-зертханалық жұмыс Тақырып. Суспензиялық культураларды алу әдістері Сабақтың мақсаты
жүктеу/скачать 0,79 Mb.
|
Биотехнология 4-зертхана
Топырақ туралы алғашқы білім, 3-4 тәж.сабақтар СҚжДТ, биотехнология кітап, Темірқұл Алтынай 1912 зикр, СРСП 2, СӨЖ №1 биохимия,Тоқтарова Әсем, annotation88215, Алгоритм, СРС СӨЖ (4), Темірқұл Алтынай 19-12 зикр,1 практика тапсырмасы!), zadanie 1 (3) (1), 2020 referat 6842314 (1), СРСП 6апта Даярбек Диана, Темірқұл Алтынай 19-12 зикр.2-апта,2-СӨЖ тапсырмасы!
- Бұл бет үшін навигация:
- Cell suspension culture | Technique involved | Notes | Procedure | Bioreactor | Bio science
| Жұмыстың мақсаты - жасушаның өміршеңдігін және суспензия культураларының агрегация дәрежесін анықтаудың әдісін уйрену.
Материалдар мен жабдықтар: темекі суспензиясы, 0,1% метилен көк немесе бейтарап қызыл ерітінді, пипетка, шыны таяқша, Горяевтың камерасы, микроскоп. Жұмыс барысы: Суспензия препаратын дайындаңыз: суспензияны колбаға шайқаңыз, тамшуырмен аз мөлшерде алыңыз, суспензия тамшысын санау камерасына салыңыз, бояу тамшысын қосыңыз, жабын шынысымен жабыңыз, артық сұйықтықты сүзгі қағазымен алыңыз. Препаратты микроскопың кішкене үлкейткіші астына қойып, агрегаттағы 3 көріну сызығындағы жасушаларды санаңыз (кем дегенде үш препарат қараңыз). Нәтижелерді кестеге жазыңыз.
Ескерту: o - боялған жасушалар мен агрегаттар, н - боялмаған жасушалар мен агрегаттар. Бір пепараттың суретін сал, суспензия жасушаларының морфологиясын сипаттаңыз (пішіні, мөлшері). Суспензияның агрегаттану дәрежесі (қандай фракциялар басым,%) және суспензияның өміршеңдігі туралы қорытынды жасау. 3. Фитогормондардың темекі клеткалары культурасындағы морфогенез бағытына әсері Морфогенездің әртүрлі түрлері бар: соматикалық эмбриогенез және органогенез, олар өз кезегінде бағаналы, тамырлы және гүлді болып бөлінеді. Соматикалық эмбриогенез кезінде бағаналы жасушалардан сабақтар мен тамырлар пайда болатын биполярлық ұрық тәрізді құрылымдар түзіледі. Морфогенезді әр түрлі факторларды қолдана отырып, каллустық тіндердің культурасына енгізуге болады: жарық, температура, қоректік ортаның құрамы және, ең алдымен, фитогормондардың қатынасындағы өзгерістер. 1955 жылы Скоог пен Миллер қазіргі кезде белгілі, жасуша мен тіндердің культурасындағы гормоналды реттеу туралы гипотезаны ұсынды: егер қоректік ортадағы ауксиндер мен цитокининдердің концентрациясы салыстырмалы түрде тең болса немесе ауксиндердің концентрациясы цитокининдердің концентрациясынан сәл асып кетсе, онда каллус түзіледі; егер ауксиндердің концентрациясы цитокининдердің концентрациясынан едәуір асып кетсе, онда тамырлар түзіледі; егер ауксиндердің концентрациясы цитокининдердің концентрациясына қарағанда әлдеқайда төмен болса, онда бүршік пен побег түзіледі. Морфогенетикалық потенциалы жоғары каллустар әдетте күңгірт, жинақы, құрылымды, құрамында жасыл хлорофилл бар, олар морфогенез зоналары болып табылады. Кейіннен онда побег немесе регенерант-өсімдіктер пайда болады. Борпылдақ каллустар не органогенезге мүлдем қабілетсіз немесе олар тек тамырларды құрайды. Жұмыстың мақсаты - темекі клеткасының культурасындағы морфогенез бағытына қоректік ортадағы ауксиндер мен цитокининдердің әр түрлі қатынасының әсерін зерттеу. Материалдар мен жабдықтар: асептикалық өсірілген өсімдіктер мен темекі каллусының культурасы, ламинар - бокс, ИУК (2 мг / л) және БАП (0,1 мг / л) бар MC қоректік ортасы бар зарарсыздандырылған Петри ыдыстары, сонымен қатар ИУК (0,1) мг / л) және БАП (2,0 мг / л), пинцет, скальпель, 96% және 70%спирті бар флакондар, спирт шамы, стерильді мақта. Жұмыс барысы: Жұмыс асептикалық жағдайда жүргізіледі. Стерильденген темекі өсімдіктерінің жапырақтарынан бөлініп алынған эксплантар асептикалық түрде ауксиндер мен цитокининдердің құрамымен ерекшеленетін MC агарланған ортасы бар петрия ыдыстарына отырғызылады. Петри ыдыстары мөрленіп, қол қойылып, температурасы 24,5 ° C болатын термостатқа орналастырылып, 4-5 апта бойы инкубацияланады. Осы уақыттан кейін қоректік ортадағы ауксин және цитокинин белсенділігі бар гормондардың әртүрлі қатынасына байланысты әртүрлі морфогенетикалық реакцияларға талдау жасалады. Нәтижелерді кестеге салыңыз.
Фитохормондардың темекі клеткалары культурасындағы морфогенез бағытына әсері туралы, өсіру ұзақтығына байланысты каллус ұлпаларының морфогенетикалық қабілеті туралы қорытынды жасау. Бақылау сұрақтары. 1. Суспензия культураларын алудың негізгі әдістері қандай? 2. Өсімдік жасушаларының суспензиялы культураларын алу үшін каллустық тіндерге қандай талаптар қойылады? 3. Суспензия культураларының орташа өсу циклі қандай? 4. Жасушалық суспензиялардың субкультуралары қалай жүзеге асырылады? Пайдаланылған әдебиеттер: 1.Кузьмина, Н. А. Основы биотехнологии: учебное пособие для студентов биологического факультета / Н.А. Кузьмина.www.biotechnolog.ru 2. Лабораторно-практические занятия по сельскохозяйственной биотехнологии. Методические указания / под ред. В.С. Шевелухи. – М.: Издво МСХА, 1996. 90 с. 3. Мокроносов, А. Т. Малый практикум по физиологии растений: Учеб. пособие / А.Т. Мокроносов. М.: Изд-во МГУ, 1994. 184 с. 4. Сорокина, И. К. Основы биотехнологии растений. Культура клеток и тканей: Учебное пособие / И.К. Сорокина, Н.И. Старичкова, Т.Б. Решетникова, Н.А. Гринь. 2002. 45 с. Cell suspension culture | Technique involved | Notes | Procedure | Bioreactor | Bio scienceЭтапы культивирования микроорганизмовКлеточная инженерияжүктеу/скачать 0,79 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||