Дәріс №13 Қарастырылатын сұрақтар
жүктеу/скачать 3,06 Mb.
|
ДНК секвенирование (2)
Nevropatologia Badalyan, Электрондық денсаулық сақтау жүйесі - Емтихан (6)[1], Баламалы энергия ҚМЖ
- Бұл бет үшін навигация:
- Максам-Гилберт бойынша секвенирлеу
| Сэнгер әдісі
«плюс-минус» әдісі Қажетті материалдар:
Дезоксинуклеотидтердің бірі фосфатпен (32Р) радиоактивті түрде таңбаланады. Әрі қарай күшейтілген фрагменттердің қоспасын реакцияға түспеген дезоксинуклеозид трифосфаттардан тазарту керек. Қоспа сегіз тең бөлікке бөлінеді. «Плюс» - жүйеде дезоксинуклеозид трифосфаттарының төрт түрінің әрқайсысының қатысуымен төрт ПТР реакциясы жүргізіледі; «Минус» - жүйеде параллель олардың әрқайсысы болмаған кезде төрт ПТР реакциясы жүргізіледі. Әрі қарай, нәтижелер электрофорезнемесе радиоавтография арқылы бейнеленеді және ДНҚ тізбегін анықтайды, «плюс» жүйесінде ПТР-ны тоқтату (тоқтату) белгілі бір dNTP-ден кейін, ал «минус» жүйесінде оның алдында болады. Сэнгер ДНҚ секвенирлеу: «Терминаторлар» әдісі Бірнеше жылдан кейін Сэнгер әріптестерімен бірге «Терминаторлар» әдісі немесе «тізбекті бұзу» әдісі деп аталатын секвенирлеудің тағы бір әдісін ұсынды. Бұл әдістің мәні мынада: әдеттегі нуклеотидтердің аналогтары (дидеоксинуклеозидтрифосфаттар) реакциялық қоспаға қосылады, олардың синтезделген тізбекке қосылуы оны одан әрі синтездеуінің тоқтауына (терминация) әкеледі, ал алынған «кесек» бойынша реттелген ДНҚ фрагментінің соңғы әрпін орнатуға болады Максам-Гилберт бойынша секвенирлеу Бұл әдіс Сенгер әдісіне (тізбекті терминациялау) балама болып ұсынылды. Maxam-Gilbert әдісінің негізгі қадамдары:
жүктеу/скачать 3,06 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|